KIRGIZİSTAN’IN CHUY BÖLGESİNDE KOYUNLARDA İLK DEFA THEİLERİA VE BABESİA TÜRLERİNİN REVERSE LİNE BLOTTİNG YÖNTEMİYLE ARAŞTIRILMASI

Erol U., Şahin Ö. F., Aytmırzakızı A., Altay K.

9. INTERNATIONAL CONFERENCE ON AGRICULTURE, ANIMAL SCIENCES AND RURAL DEVELOPMENT, Burdur, Türkiye, 19 - 20 Mart 2022, ss.953-965

  • Yayın Türü: Bildiri / Tam Metin Bildiri
  • Basıldığı Şehir: Burdur
  • Basıldığı Ülke: Türkiye
  • Sayfa Sayıları: ss.953-965
  • Sivas Cumhuriyet Üniversitesi Adresli: Evet

Özet

Theileria ve Babesia türlerin neden olduğu enfeksiyonlar, tropikal ve suptropikal bölgelerde daha yoğun olmak üzere tüm dünyada yaygın olarak görülmekte ve hayvan yetiştiriciliğinde önemli ekonomik kayıplara neden olmaktadır. Hastalığa sebep olan türler konaklara Ixodidae ailesine bağlı kenelerle nakledilmektedir.

Bu çalışmanın amacı Kırgızistan’ın Chuy bölgesinde koyunlarda Theileria ve Babesia türlerinin varlığı ve yaygınlığının moleküler yöntemlerle ile araştırılmasıdır. Bu amaçla bölgeden bir yaşından büyük 157 koyundan kan örnekleri EDTA’lı tüplere alınarak DNA izolasyonunda kullanılıncaya kadar -20°C’de saklanmıştır. Kan örneklerinden total genomik DNA elde edilmiş, elde edilen DNA’lar Theileria ve Babesia türlerinin 18S ribozomal RNA geninin hypervariable V4 bölgesini çoğaltan spesifik primerler (RLB-F2 ve biyotin işaretli-RLB-R2) vasıtasıyla PCR işlemine tabi tutuluştur. Bu işlemden sonra PCR ürünleri Theileria/ Babesia catchall ve türe özgü dizayn edilen (Theileria sp., T. lestoquardi, T. ovis, Theileria sp. OT1, Theileria sp. OT3, Theileria sp. MK, T. luwenshuni, T. uilenbergi, T. separata, Babesia sp., B. ovis, B. motasi, B. crassa ve Babesia (Lintan) China) problarla hibridizasyon işlemi gerçekleştirilmiştir.

Bu çalışmada Theileria ve Babesia türleri yönünden incelenen 157 koyun kan örneğinin dokuzunda (%5,73) T. ovis tespit edilmiştir. Kan örneklerinde diğer koyun piroplasmosis patojenlerinin DNA’sına rastlanmamıştır. Pozitif bulunan bir örneğin DNA dizilimi belirlenmiş ve Mega-X programıyla hizalanarak konsensus sekans oluşturulmuştur. Konsensus sekans BLAST analizi kullanılarak GenBank’ta bulunan T. ovis izolatlarıyla karşılaştırılmış ve sonuçların %100 uyumlu olduğu görülmüştür. Daha sonra konsensus T. ovis dizisi GenBank’a ‘GenBank erişim numarası: OM721746’ ile yüklenmiştir.

Sonuç olarak bu çalışma ile Kırgızistan’ın Chuy bölgesinde koyunlarda piroplasmosis etkenleri ilk kez moleküler yöntemlerle araştırılmış ve örneklerin %5,73’ünün T. ovis ile enfekte olduğu tespit edilmiştir. T. ovis koyunlarda hafifte olsa enfeksiyonlara ve verim kayıplarına neden olabilmektedir. Bu nedenle bölgedeki koyun yetiştiricilerinin etkenden korunmak ve verim kayıplarının azaltılması amacıyla gerekli önlemleri almaları gerektiği düşünülmektedir. 

Infections caused by Theileria and Babesia species are common almost all over the world, especially in tropical and subtropical regions, and the infections have a negative economic impact on animal husbandry. The species that cause the disease are transmitted to hosts by ticks belonging to the Ixodidae family.

The aim of this study was to research the presence and distribution of Theileria and Babesia species in the sheep in the Chuy region of Kyrgyzstan using molecular identification techniques. For this purpose, blood samples were drawn into collection tubes with EDTA from 157 sheep, older than one age, and were stored at -20°C until DNA isolation. The genomic DNA was obtained from blood samples and stored at -20°C until use PCR. In a polymerase chain reaction (PCR), the hypervariable V4 region of the 18S ribosomal RNA gene was amplified with a set of general primers (RLB-F2 and biotinylated-RLB-R2) specific for all Theileria and Babesia species. The PCR products were hybridized against Theileria/ Babesia catchall and species-specific (Theileria sp., T. lestoquardi, T. ovis, Theileria sp. OT1, Theileria sp. OT3, Theileria sp. MK, T. luwenshuni, T. uilenbergi, T. separata, Babesia sp., B. ovis, B. motasi, B. crassa, and Babesia (Lintan) China) probes.

In this study, out of 157 blood samples were screened for Theileria and Babesia species, and T. ovis was found in the nine samples (5.73%). DNA of other ovine piroplasmosis agents was not detected in the current study. The DNA sequence of a positive sample has been determined. DNA sequence results were aligned using Mega-X. Our consensus sequence was compared with sequences present in GenBank using BLAST analysis, and 100% homology was determined between our sequence and T. ovis isolates deposited to the GenBank from different parts of the world.  The consensus sequence was uploaded to the GenBank under accession number: OM721746

In conclusion with the current study, the etiological agents of ovine piroplasmosis were researched for the first time using molecular identification techniques in the Chuy region in Kyrgyzstan, and 5.73% of the samples were determined to be infected with T. ovis. The species can mostly cause mild infection among sheep flock but also lead to economic losses. For this reason, it is thought that farmers and veterinarians should be taken into account T. ovis to reduce economic losses in sheep flocks.