Türkiye’deki Tavuklarda Onkogenik Formlu Marek Hastalığının (MD) Deteksiyonu (2011-2020): Marek’s EcoRI-Q (MEQ) Geni Genetik Analizleri


Abaylı H., Özbek R.

XV. Ulusal Veteriner Mikrobiyoloji Kongresi (Uluslararası Katılımlı), Şanlıurfa, Türkiye, 26 - 28 Ekim 2022, ss.28-29

  • Yayın Türü: Bildiri / Özet Bildiri
  • Basıldığı Şehir: Şanlıurfa
  • Basıldığı Ülke: Türkiye
  • Sayfa Sayıları: ss.28-29
  • Sivas Cumhuriyet Üniversitesi Adresli: Evet

Özet

Marek hastalığı (MD) tavukların yaygın lenfoproliferatif ve nöropatik hastalığıdır. Hastalık nadiren hindi, sülün ve kazlarda da görülebilmektedir. Etiyolojik ajan Herpesviridae ailesinde Alphaherpesvirinae alt ailesindeki Mardivirus genusunun bir üyesi olan Gallid alphaherpesvirus 2 veya Marek’s disease virus serotip 1 (MDV-1) olarak kimliklendirilmektedir. Son yıllarda Türkiye’de ve diğer dünya ülkelerinde aşılı ve aşısız tavuk sürülerinde Marek hastalığı salgınları artış göstermiştir. Amaç: Bu çalışmada Türkiye’de 10 yıllık süreçte (2011-2020) küçük/büyük kapasiteli tavuk işletmelerinde ortaya çıkan Marek hastalığı salgınından elde edilen MDV-1 suşlarının MEQ geni genetik analizlerinin yapılması amaçlanmıştır. Çalışmada kullanılan klinik materyaller Elazığ ilçe/köy veya civar şehirlerdeki (Adıyaman, Diyarbakır, Malatya) tavuk işletmelerinde ölüm veya iştahsızlık, durgunluk, halsizlik gibi semptom gösteren ve nekropsi notları arasında çeşitli büyüklükte beyaz odaklar taşıyan ve karaciğer ve dalakların 2-3 kat büyümüş olduğu görülen hayvanlardan elde edilmiştir. MDV-1’in MEQ genine spesifik PCR taraması sonrasında pozitiflik gösteren hayvanlar çalışmaya dahil edilmiştir. Çalışmada MEQ genleri tam uzunlukta (1020 nükleotit) amplifiye edilmiş ve 339 amino asit uzunluğunda MEQ protein dizileri elde edilmiştir. Sekans ve filogenetik analizde yeni (11 MDV-1 suş; MW219788- MWMW219798) ve diğer bazı Türk MDV-1 suşları ile referans MDV-1 suş/izolatları tercih edilmiş olup bu aşamada MEGA-X software’den faydalanılmıştır. MEQ transaktivasyon/represyon bölgesindeki bozulmamış dörtlü ardışık prolin (P) [PPPP] tekrarlarının fazlalığının (7-8) onkojeniteyi represe ettiğine dair raporlar mevcuttur. Bu çalışmada MDV-1 suşları very virulent (vv) ve very virulent plus (vv+) patotiplere benzer biçimde 3-5 arasındaki sayıda PPPP tekrar içerdiği tespit edilmiştir. 2011 yılında Malatya ilinden elde edilen suşa ait MEQ aa dizisinin 153. pozisyonunda (P’den Q’a) sıklıkla vv ve vv+ patotipli referans Amerikan suşlarında rastlanan yeni bir yer değiştirmeye rastlanmıştır. Filogenetik ağaçlar 1000 replikatta Maximum Likelihood metodu ve Tamura Nei modeli kullanılarak oluşturulmuştur. Filogenetik ağaç üzerinde bazı Türk MDV-1’leri genogrup 1’de Avrupalı, Amerikan ve Asyalı v, vv ve vv+ patotipli suş/izolatlar ile aynı filogrupta yer alırken bazıları genogrup II’de Amerikan suş/izolatları ile aynı filogrupta yer almıştır. MDV-1’in son yıllarda virülensini artırdığı ve aşılı sürülerde dahi bağışıklığı kırarak salgınlara yol açtığı bilinmektedir. Bu çalışmada incelenen tavuk sürülerinden ikisinin aşılı (Herpes virus of turkey-HVT suşu) diğerlerinin aşısız olduğu düşünüldüğünde alınacak başlıca tedbir güçlü hücresel ve humoral yanıt oluşturan HVT/SB-1 kombinasyonları veya CVI988 ile aşılamalarının yapılması olacaktır. Bunlara ilave olarak sıkı biyogüvenlik önlemleri (dezenfeksiyonlar ve temiz çiftlik uygulamaları, uygun kabul uygulamaları, all in/all out politikası, kuş türüne ve sahaya uyarlanmış doğru aşılama programları vb.) MD insidansını önemli ölçüde azaltabilecek ve böylece hastalıktan kaynaklanan ekonomik kayıpların önüne geçilmiş olacaktır.

Marek's disease (MD) is a common lymphoproliferative and neuropathic disease of chickens. The disease can also rarely be seen in turkeys, pheasants and geese. The etiologic agent is identified as Gallid alphaherpesvirus 2 or Marek's disease virus serotype 1 (MDV-1), a member of the Mardivirus genus in the Alphaherpesvirinae subfamily in the Herpesviridae family. In recent years, Marek's disease outbreaks have increased in vaccinated and unvaccinated chicken flocks in Türkiye and other countries around the world. In this study, it was aimed to perform a genetic analysis of the MEQ gene of MDV-1 strains obtained from the Marek's Disease outbreak that emerged in small/large capacity poultry farms in Türkiye over a 10-year time period (2011- 2020). The clinical materials used in the study were obtained from chickens raised in the poultry farms in Elazığ county/village or surrounding cities (Adıyaman Diyarbakır, Malatya). Symptoms such as death or loss of appetite, stagnation, and malaise were the common feature in these animals and they had 2-3 times enlarged liver and spleen with a white focus of various sizes according to necropsy notes. Animals that showed positivity after MEQ-specific PCR screening for MDV-1 were included in the study. In the study, MEQ genes were amplified in full length (1020 nucleotides) and MEQ 29 protein sequences with a length of 339 amino acids were obtained. In the sequence and phylogenetic analysis, new (11 MDV-1 strains; MW219788-MWMW219798) and some other Turkish MDV-1 strains and reference MDV-1 strain/isolates were used, and at this stage they were performed by MEGA-X software. There are reports that the high number of quaternary whole proline (P) [PPPP] repeats (7-8) in the MEQ transactivation/repression region contributes to the repression of oncogenicity. In this study, MDV-1 strains contained 3-5 PPPP repeats, similar to very virulent (vv) and very virulent plus (vv+) pathotypes. A new substitution, which is frequently encountered in reference American strains with vv and vv+ pathotype, was found at position 153 (P to Q) of the MEQ aa sequence of the strain obtained from Malatya province in 2011. Phylogenetic trees were created using the Maximum Likelihood method and Tamura Nei model in 1000 replicates. On the phylogenetic tree, some Turkish MDV-1s were in the same phylogroup in genogroup 1 with European, American and Asian strains/isolates with v, vv, and vv+ pathotypes, while some were in the same phylogroup with American strains/isolates in genogroup II. It is known that MDV-1 has increased its virulence in recent years and caused epidemics by breaking the immunity even in vaccinated flocks. Two of the chicken flocks examined in this study were vaccinated (Herpes virus of turkey-HVT strain) and the others were unvaccinated. Accordingly, the main precaution should be to vaccinate with HVT/SB-1 combinations or CVI988, which produce a strong cellular and humoral response. In addition to these, strict biosecurity measures (disinfections and good farm cleaning, appropriate reception practices, all in/all out policy, correct vaccination programs adapted to bird species and fields etc.) will significantly reduce the incidence of MD, thus preventing economic losses from the disease.