Çapraz bağlı enzim agregatları formundaki proteaz enziminin taşıyıcısız immobilizasyonu
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Sivas Cumhuriyet Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, BİYOMÜHENDİSLİK ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2015
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ALPER GÖKALP
Danışman: UĞUR SALGIN
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada, Bacillus sp. türü mikroorganizmalardan izole edilmiş bir ticari proteaz enziminin; önce amonyum sülfatla ile presipitasyonu ve daha sonra glutaraldehitle oluşan agregatların çapraz bağlaması ile çapraz bağlı enzim agregatları formunda immobilizasyonu gerçekleştirilmiştir. En uygun immobilizayon ortam bileşimi; 50 mM pH=7 sodyum sülfat tamponunda hazırlanan bileşimlerinde 200 mg/mL başlangıç enzim derişimi, 700 mg/mL amonyum sülfat derişimi ve 60 L/mL glutaraldehit derişimi olarak saptanmıştır. En yüksek katalitik aktivitenin elde edildiği immobilizasyon bileşiminde sesntezlenen çapraz bağlı proteaz agregatlarının katalitik aktivitesine pH (6 - 10), sıcaklık (25 - 70oC), karıştırma hızı (150 - 750 rpm) ve değişik çözücü sitemlerine karşı toleransı araştırılmıştır. Enzim sistemlerinin geniş bir pH, sıcaklık ve karıştırma hızı aralığında 12 saat süreyle yüksek performans sergilemiş olup optimum pH=7 ve optimum sıcaklık 37oC olarak saptanmıştır. 2 gün süreyle değişik çözücü sistemlerinde maruz bırakılan enzimlerin katalitik aktivileri yüksekten başlayarak; Sodyum fosfat tamponu > Etilasetat > Metanol > Siklohekzan > İzopropanol > Hekzan > İzooktan > Dimetilformamit > Etanol > Kloroform > Su > Dimetilsülfoksit olarak sıralanmaktadır. Geliştirilen enzim sistemlerinin depolama kararlılığı 6 ay süreyle incelenmiş ve bu süre sonunda yaklaşık %25 aktivite kaybı gözlenmştir. Ayrıca, serbest ve immobilize formadaki enzimler Michaelis-Menten kinetik sabitleri belirlenerek karakterize edilmiştir.