Onobrychis tournefortii (Wild.) Desv.'in tohumundan lipolitik bir fraksiyonun saflaştırılması ve temel kinetik özelliklerinin belirlenmesi

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Sivas Cumhuriyet Üniversitesi, Fen Fakültesi, Biyokimya Bölümü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2018

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: HİLAL KARAKAŞ

Danışman: Salih Görgün

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada, sırasıyla Q sefaroz anyon değişim ve Sefakril S-200 HR kolon kromatografilerini kullanarak, Onobrychis tournefortii (Desv.)'in tohumundan esteraz aktivitesine sahip olan lipolitik bir fraksiyon 1.361 μmol/dk.mg protein spesifik akti-vite ve 7.08 kat saflıktaki saflaştırma parametreleriyle kısmi olarak saflaştırılmıştır. Nativ-poliakrilamid jel elektroforezi (Nativ-PAGE) çalışmaları yerine getirilerek, ho-mojenat örnekleri molekül kütlelerinin 95 kDa, 59 kDa ve 42 kDa olduğu üç esterolitik band göstermiştir. Kısmi saflaştırılmış tohum esteraz fraksiyonu, 59 kDa ve 42 kDa'luk molekül kütlelerine sahip olan esteraz bantlarını içermiştir. Bu fraksiyonun sıcaklık ve pH optimumları sırasıyla 40 °C ve 8.0 olarak belirlenmiştir. Esterolitik ak-tivite üzerine dört farklı substratın (p-nitrofenil asetat; p-NPA, p-nitrofenil butirat; p-NPB, p-nitrofenil dodekanoat; p-NPD, p-nitrofenil palmitat; p-NPP) etkisi karşılaştı-rıldığında, en yüksek aktivite p-NPB üzerinde sergilenmiştir. Substrat olarak p-NPB kullanılarak, Vmax ve Km değerleri sırasıyla 0.2635 μmol.ml-1dk-1 ve 0.0808 mM olduğu bulunmuştur. Sonuçlarımız bu bitki türünün tohumundan daha saf bir esteraz enzimi elde etmek için, daha fazla kromatografik adımın gereksinildiğini önermektedir.