Protein ayırma teknolojisi için HPLC kolon dolgu materyali tasarımı
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Sivas Cumhuriyet Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Mühendisliği Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: EBRU SAĞ
Danışman: BERNA SARAÇOĞLU KAYA
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Tez kapsamında, Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) için monodispers ve gözenekli partikül formunda poli(vinil asetat-co-divinilbenzen) [poli(VAc-co-DVB)] ve poli(divinilbenzen) (PDVB) kolon dolgu materyalleri "Çok Basamaklı Mikrosüspansiyon Polimerizasyonu" yöntemi ile yaklaşık 9.5 mm boyutunda sentezlenmiş ve kolon performansları Ters Faz Sıvı Kromatografisi (Reverse Phase Chromatography, RPC) modunda test edilmiştir. Partiküller bazik ortamda hidrolizlenerek, partikül yüzeyi "hidroksi" formuna dönüştürülmüş ve kromatografik kullanım için uygun yüzey ve gözenek yapısına sahip poli(vinilalkol-co-divinilbenzen) [poli(VA-co-DVB)] partiküller elde edilmiştir. Partiküllerin karakterizasyonu Taramalı Elektron Mikroskobu (Scanning Electron Microscopy, SEM), yüzey alanı ve gözeneklilik ölçüm sistemi (Brunauer–Emmett–Teller, BET) ve Fourier Transfer Infrared Spektrofotometre (Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FTIR) ile yapılmıştır. Sentez sonrası elde edilen partiküllerle doldurulan kolonların kromatografik performansları incelediğinde, poli(VAc-co-DVB) (2500 tabaka/m) kolon için literatürdeki değerlerden daha yüksek ve kararlı teorik tabaka sayısı değerleri elde edilirken pik çözünürlük değerlerinin de kabul edilen değerlerin üstünde olduğu görülmüştür. Poli(VAc-co-DVB) (%93-99) ulaşılan protein geri kazanım değerleri ise bütün proteinler için kantitatife yakın değerler olarak belirlenmiştir. Üretilen kolonlar için analitlerin, analizden analize ve günden güne tekrarlanabilirlik testleri yapılmış, hem "analizden analize " hem de "günden güne" BSS değerleri % 2.8'in altında bulunmuştur. Bu sonuçlar sentezlenen kolon dolgu materyallerinin başarılı bir ii şekilde RPC'de kullanılabileceğini göstermiştir. Poli(VAc-co-DVB) kolonda, monomerin (VAc) varlığının, geri-basınç değeri, kromatografik ayırma yeteneği (pik çözünürlüğü ve tabaka sayısı) ve kolondan analit geri-kazanımı ve kısa alıkonma süresi (17 dakika) açısından etkili olduğu görülmüştür. Tez kapsamında sentezlenen Poli(VAc-co-DVB) kolonu, gradyent koşullarda protein ayrımı için ticari olarak kullanılan kolonlara benzer bir kromatografik performans sergilemektedir. Bununla birlikte yüksek mekanik ve kimyasal kararlılık, protein geri kazanımı, teorik tabaka sayısı ile düşük geri basınç ve tekrarlanabilirlik değerlerine sahip olması açısından ticari kolonlara üstünlük sağlamaktadır.