Diplolepis fructuum (Rübsaamen, 1895) Hymenoptera: Cynipidae)'nin larvasından lipolitik bir fraksiyonun saflaştırılması ve temel kinetik özelliklerinin belirlenmesi

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Sivas Cumhuriyet Üniversitesi, Fen Fakültesi, Biyokimya Bölümü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2019

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: MAZEN ALTHALJI

Danışman: Salih Görgün

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Diplolepis fructuum (Rübsaamen, 1895) Rosaceae türlerinde zararlara yol açan en önemli böcek türlerinden birisidir. Biyokimyasal veri elde etmek için laboratuvarımızda 2018'de başlatılan bu çalışma ile D. fructuum'un larvasından bir esteraz (E.C.3.1.1.X) Q sefaroz anyon değişim, fenil sefaroz CL-4B ve sefakril S100-HR jel filtrasyon kromatografisini kullanarak saflaştırılmıştır. Saflaştırılan enzim 6.94 U (mg protein)-1 spesifik aktivite, 28.80 kat saflık ve % 8.80 verime sahipti. Nativ-PAGE çalışmalarında sadece bir aktivite bandı gözlenmiştir. Nativ-PAGE ve SDS-PAGE tekniklerini kullanarak, esterazın mol kütlesi yaklaşık olarak 60 kDa olarak tahmin edilmiştir. Kinetik datadan, enzimin optimum sıcaklık ve pH'ı sırasıyla 40 °C ve 9.0 olarak belirlenmiştir. Enzim, 40 °C ve pH 8.0'da 4 saat kararlıydı. 4-nitrofenil bütirat (p-NPB) substrat olarak kullanılarak, Km ve Vmax değerlerinin 0.035 mM ve 1.41 µmol (mL dk)-1 olduğu bulunmuştur. Enzim en yüksek aktivitesini p-NPB (% 100) ve 4-nitrofenil asetat (% 52) üzerinde sergilemiştir. Tüm bu veriler enzimin diğer böcek türlerinden bildirilen esterolitik enzimlerden farklı kinetik özellik ve mol kütlesi ile bir esteraz olabileceğini önermektedir.