Anaplasma phagocytophilum'un tayinine yönelik elektrokimyasal DNA sensörü geliştirilmesi ve uygulamaları

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Sivas Cumhuriyet Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, KİMYA ANABİLİM DALI, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2015

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: ÇAĞDAŞ CEYLAN

Danışman: ADİL ELİK

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışma, oldukça geniş bir konakçı grubunda enfeksiyona yol açan bir patojen olan A. phagocytophilum dizi seçimli DNA hibridizasyonunun voltametrik yöntemle tayin edildiği tek kullanımlık elektrokimyasal DNA biyosensörü geliştirilmesine yöneliktir. Herhangi bir etiketlemenin yapılmadığı bu elektrokimyasal çalışmanın esasını DNA hibridizasyonu sonrasında Guanin bazının yükseltgenme sinyalinin ölçülmesi ile bir ikili oluşumunun izlenmesi oluşturur. Söz konusu biyosensör tasarımı inozin modifiye (guanin içermeyen) probun, kalem grafit elektroda (PGE) immobilize edilmesi ve diferansiyel puls voltametrisi (DPV) ile guaninin yükseltgenme sinyalinin ölçülerek, ikili oluşumunun tayinini içerir. Bu çalışmanın ilk aşamasında, A. phagocytophilum temsil eden prob dizisi, aktive edilmiş, kalem grafit elektrot (PGE) yüzeyine yaş adsorbsiyon (wet adsorbtion) yöntemi ile immobilize edilmiş ve daha sonra prob ve hedefi arasındaki hibridizasyonun varlığı 1000 mV'da gözlenen guanin yükseltgenme sinyali ile tespit edilmiştir. Yapılan optimizasyon çalışmasında prob derişiminin 25 µg/mL, prob immobilizasyon süresi 6 dakika; hibridizasyon için hedef derişimi 40 µg/mL ve hibridizasyon süresinin 10 dakika olduğu gözlenmiştir. Geliştirilen elektrokimyasal biyosensörün spesifikliği; baz sırasından bir bazının yeri (MM) ve tüm bazlarının yerleri farklı (NC) olan hedef diziler kullanılarak test edilmiştir. Ferri/Ferro siyanür redoks sistemi altında elektrokimyasal empedans yöntemi kullanılarak yapılan empedimetrik ölçümler ile DNA hibridizasyonunun gerçekleştirildiği ayrıca teyit edilmiştir. Tayin sınırını (DL) belirlemek için hedef derişimi 0,78 - 3,90 µM arasında değişen hedef diziler kullanılmış ve tayin sınırı 0,244 µM olarak bulunmuştur.